Методы диагностики H.pylori

сыворотка
Инфицирование H. pylori сопровождается значительным нарастанием иммуноглобулинов класса IgG и IgA в сыворотке крови

Диагностика H. pylori позволяет определить наличие бактерии в организме. Бактерия хелиобатер вызывает особый вид гастрита, который ощутимо усложняет жизнь пациенту. Кроме того, опасность заражения H. pylori представляет опасность не только для самого больного, но для окружающих, так как бактерия может передаваться различными путями. На сайте gastritinform.ru вы можете ознакомиться в различными методами диагностики h pylori. Грамотно проведенное исследование — половина успеха в лечении гастрита.

Общая информация об исследовании

H. pylori
H. pylori – это грамотрицательный, факультативно-анаэробный микроорганизм, способный инфицировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки

H. pylori – это грамотрицательный, факультативно-анаэробный микроорганизм, способный инфицировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. В большинстве случаев инфицирование H. pylori (геликобактериоз, или хеликобактериоз) носит постоянный, хронический характер. Геликобактериоз очень распространен: бактерия H. pylori может быть выявлена у 50 % людей земного шара. При этом H. pylori-ассоциированные заболевания (гастрит, язва желудка или двенадцатиперстной кишки, аденокарцинома желудка, MALT-лимфома) возникают только у 15-20 % инфицированных пациентов. Особенностью этих заболеваний является их благоприятный прогноз при условии их ранней диагностики и полной эрадикации H. pylori. Ведущее значение в диагностике геликобактериоза принадлежит лабораторным методам исследования.

Общая информация о методах исследования H. pylori

Существует несколько методов выявления H. pylori. Прямые методы позволяют непосредственно выявить сам микроорганизм. Для большинства прямых методов необходим образец ткани слизистой оболочки (биоптат) и/или содержимое желудка и двенадцатиперстной кишки (аспират), которые обычно получают во время эндоскопического исследования. Таким образом, прямые методы исследования, как правило, являются инвазивными. В отличие от этого, непрямые методы выявляют не сам микроорганизм, а косвенные признаки инфекции, например специфические антитела в сыворотке крови (серологические тесты) или содержание меченого атома углерода в выдыхаемом воздухе (дыхательный уреазный тест). Так как для проведения непрямых тестов не требуется эндоскопического исследования, они называются неинвазивными. Как прямые, так и непрямые тесты на H. pylori, имеют свои преимущества и недостатки. Для точной диагностики геликобактериоза требуется сразу несколько тестов. В связи с этим особенно удобным для врача и пациента является комплексный анализ, включающий все необходимые тесты на H. pylori.

Одним из самых чувствительных методов выявления H. pylori является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). РТ-ПЦР – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в образце ткани) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. Так как анализ основан на выявлении генетического материала, РТ-ПЦР позволяет выявлять присутствие любых форм H. pylori (не только активных спиралевидных, но и неактивных кокковых, некультивируемых), в результате чего исследование характеризуется очень высокой чувствительностью, превосходящей чувствительность метода бактериологического посева.

Теоретически для осуществления РТ-ПЦР достаточно присутствие 1 молекулы ДНК. На практике концентрация возбудителя в образце должна составлять около 10-100 КОЕ/мл. Такая высокая чувствительность теста означает, что получение отрицательного результата исследования позволяет исключить H. pylori как причину заболевания. Это имеет принципиальное значение при дифференциальной диагностике НПВС-ассоциированных, стрессовых и ишемических гастритов и язв.

Следует отметить, что, несмотря на очень высокую чувствительность теста (85-98 %), ложноотрицательные результаты все же возможны. Так, например, ложноотрицательный результат может быть получен, если бактериальная нагрузка очень низкая (например, на фоне приема некоторых антибиотиков). Ошибок диагностики можно избежать при комбинации этого прямого теста с серологическими исследованиями.

сыворотка
Инфицирование H. pylori сопровождается значительным нарастанием иммуноглобулинов класса IgG и IgA в сыворотке крови

Инфицирование H. pylori сопровождается значительным нарастанием иммуноглобулинов класса IgG и IgA в сыворотке крови. Эти иммуноглобулины (антитела) определяются в крови с помощью непрямых тестов. IgG обнаруживаются в 95-100 % случаев геликобактериоза, а IgA – в 68-80 %. Исследование позволяет определить титр антител, то есть является количественным. Как правило, высокие титры антител более характерны для активной, текущей инфекции. Следует отметить, однако, что четкой корреляции между титром антител и степенью тяжести инфекции нет.

Серологические тесты, как и метод РТ-ПЦР, имеют некоторые ограничения. Так, результат анализа зависит от особенностей иммунного ответа пациента. Иммунный ответ пациентов, принимающих цитостатические препараты, и пожилых людей характеризуется пониженной выработкой специфических антител (любых, в том числе к H. pylori). По этой причине во избежание диагностических ошибок серологические тесты целесообразно дополнять прямыми тестами. Эта особенность была учтена при составлении комплексного анализа на H. pylori.

Таким образом, комплексный анализ на H. pylori – это комбинация необходимых и достаточных тестов для выявления этого микроорганизма. Комплексный анализ не предназначен для контроля лечения. Результат как РТ-ПЦР, так и исследования иммуноглобулинов IgG и IgA будет оставаться положительными даже в случае полной эрадикации H. pylori. Ложноположительный результат РТ-ПЦР в этом случае обусловлен способностью этого метода выявлять ДНК любых, даже разрушенных микроорганизмов, ложноположительный результат серологических тестов − особенностями динамики иммунного ответа.

Бактериологический метод

Метод основан на идентификации возбудителя путем посева из биоптата СОЖ. Полученные при эндоскопии биоптаты помещают в пробирки с транспортными средами (Cary-Blaer или Pylori-средой). Посев материала желательно проводить в день его поступления в лабораторию. Инкубация посевов осуществляется в микроаэрофильных условиях при содержании кислорода ≤5%. В дальнейшем проводится идентификация выделенных культур, определяются их морфологические, тинкториальные свойства, чувствительность к антибиотикам.

Специфичность метода – 98%, чувствительность – 76–90% [16], по другим данным – 50–90% [17]. Определенное количество ложноотрицательных результатов возникает при несоблюдении или неточном соблюдении методики исследования. Несмотря на точность метода, он редко используется в обычной клинической практике из-за длительности анализа (средняя продолжительность исследования – 7 дней), сложности его постановки и высокой стоимости. Метод рекомендуется после двух неудачных курсов эрадикационной терапии, когда выбор антибиотиков определяется чувствительностью НР к ним [10, 13].

Виды анализа на хеликобактер пилори

Выявить присутствие коварной бактерии в организме можно разными способами.

Анализ кала

Этот анализ является качественным, то есть отвечает на вопрос, есть ли хеликобактер пилори в организме или нет. Исследование проводится в лаборатории методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Анализ отличается высокой точностью — до 95%. Данный анализ является самым простым видом диагностики. Его рекомендуют детям, пожилым людям и тяжелобольным пациентам.

Анализ крови

  • Иммуноферментный анализ (ИФА). Антиген хеликобактер пилори в человеческом организме вызывает ответную реакцию иммунной системы — выработку антител, или иммуноглобулинов. Данный анализ, как и анализ кала, является качественным. В роли биоматериала выступает венозная кровь. Помимо описанных выше симптомов и состояний, этот анализ также назначают в качестве профилактического обследования лицам, имевшим бытовые контакты с людьми, страдающими заболеваниями желудочно-кишечного тракта.
  • Метод вестерн-блота. Данное исследование проводится, если у пациента обнаружены антитела к хеликобактер пилори. Этот анализ является более специфичным методом диагностики, так как дает дифференцированные сведения об антителах. Точность определения количества антител достигается путем разделения с помощью электрофореза белков экстракта бактерии. Биоматериал для исследования — венозная кровь.

Гистологический метод

ГМ позволяет непосредственно визуализировать НP и может быть рекомендован для первичной диагностики у больных, которым показана ЭГДС
ГМ позволяет непосредственно визуализировать НP и может быть рекомендован для первичной диагностики у больных, которым показана ЭГДС

ГМ позволяет непосредственно визуализировать НP и может быть рекомендован для первичной диагностики у больных, которым показана ЭГДС. Материалом исследования является биоптат СОЖ. Преимуществами ГМ являются простота исполнения, удобство хранения, транспортировки. Специфичность гистологического метода может достигать 100%, а чувствительность – 91–93% [18].
Высокочувствительным (97%) и высокоспецифичным (100%) методом для диагностики инфекции НР является флюоресцентная гибридизация in situ (метод FISH) на гистологических препаратах. Метод FISH может идентифицировать кокковидную форму НР, которая обычно не обнаруживается путем рутинного гистологического исследования. Кроме того, FISH – это быстрый, точный и экономически эффективный метод обнаружения устойчивости к кларитромицину НР в образцах биопсии желудка [15].

Несмотря на высокую чувствительность гистологического метода, на его диагностическую точность могут оказать влияние количество биоптатов и место их забора. Для получения оптимальной информации рекомендуется множественная биопсия, которая также обеспечивает морфологическую оценку СОЖ [19]. Сиднейская система рекомендует исследование не менее пяти биоптатов: по два из антрального отдела (2–3 см от привратника по большой и малой кривизне), по два из тела желудка (по большой и малой кривизне, примерно в 8 см от кардии) и один из угла желудка. Ценность исследования повышается при оценке степени и стадии гастрита по системе OLGA или OLGIM, которые позволяют оценить прогноз заболевания [20].

При малой обсемененности НР, а также при утрате бактерий в процессе подготовки препаратов вероятны ложноотрицательные результаты. При слабой подготовке гистолога возможна идентификация в качестве НР других микроорганизмов – ложноположительный результат.
Чувствительность и специфичность ГМ у пациентов с кровотечением из верхних отделов ЖКТ в среднем ­составляют лишь 70% [21]. Поэтому к вопросу диагностики и лечения НР следует вернуться в период ремиссии в плановом порядке.

Следует учитывать, что обнаружить НР удается только на достаточно тонких и хорошо окрашенных срезах. При наличии атрофических изменений в СОЖ повышается частота ложноотрицательных результатов. Более того, в области кишечной метаплазии HР в большинстве случаев не обнаруживается ни при обычных, ни при специальных методах окрашивания, несмотря на серологические признаки инфекции. Исчезновение HР коррелирует с развитием кишечной метаплазии и снижением секреции желудка [22]. У пациентов, принимающих антисекреторные средства (H2-блокаторы, ИПП), препараты висмута и антибиотики, чувствительность и специфичность ГМ снижены [19, 22]. Универсальной рекомендацией является отмена ИПП за 2 нед до проведения исследования, антибиотиков и препаратов висмута – за 30 дней [23].

Цитологический метод является одним из вариантов гистологического исследования. Материалом являются мазки-отпечатки биоптатов СОЖ, взятых при эндоскопическом исследовании, которые в последующем высушиваются и окрашиваются по методу Романовского–Гимзы.

Быстрый уреазный тест

БУТ является непрямым методом диагностики НР на основе выявления уреазной активности бактерии
БУТ является непрямым методом диагностики НР на основе выявления уреазной активности бактерии

БУТ является непрямым методом диагностики НР на основе выявления уреазной активности бактерии. Тест требует взятия биоптата СОЖ, который помещается в пробирку (лунку) с мочевиной и индикатором на жидкостной, гелевой или сухой основе. По изменению цвета индикатора при повышении рН среды в результате расщепления мочевины микробной уреазой можно с достаточно высокой точностью идентифицировать НР. В клинической практике при наличии показаний к эндоскопии и отсутствии противопоказаний к проведению биопсии БУТ рекомендуется использовать в качестве диагностического метода первой линии [24].

Чувствительность БУТ в зависимости от количества биоптатов варьирует в пределах 80–90% [26] (по другим данным – от 61 до 74% [27]). Увеличение количества биоптатов, их забор из двух отделов желудка (из тела и антрума) позволяют увеличить чувствительность БУТ [28]. При использовании качественных тестов и нескольких гастробиоптатов, хорошей обработке биопсийных щипцов специфичность теста может достигать 95–100% [25, 26] (по другим данным – 90% [17]). Ложноположительные результаты наблюдаются редко и могут быть обусловлены присутствием других уреазосодержащих бактерий, таких как Proteus mirabilis, Citrobacter freundii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae и Staphylococcus aureus. Ложноотрицательные результаты теста наблюдаются чаще, чем ложноположительные, что не позволяет использовать отрицательный результат для исключения НР [10]. Ложноотрицательные результаты могут быть получены у пациентов, перенесших язвенное кровотечение, на фоне приема ИПП, антибиотиков, препаратов висмута, а также при выраженной атрофии или метаплазии СОЖ [29].

Таким образом, положительный результат БУТ свидетельствует о наличии НР и дает возможность назначать лечение, но отрицательный – не позволяет исключить НР, поэтому БУТ не рекомендован для оценки эффективности эрадикации [10].

13С/14С-уреазный дыхательный тест

УДТ также основан на выявлении уреазной активности НР. В присутствии НР происходит гидролиз принятого per os раствора мочевины, меченного изотопом углерода (13C или 14C). Углекислый газ (13CO2 или 14CO2) поступает в кровь и, в конечном итоге, выделяется через легкие в выдыхаемом воздухе. Пробы воздуха берутся исходно и через определенное время (при использовании 13C-мочевины – через 30 мин) после приема тестового раствора. Прирост меченого CO2 выражается как дельта по сравнению с исходным значением (DOB). Обычно в качестве критерия присутствия инфекции HР используют DOB >2,0‰. Показано, что значение DOB положительно коррелирует с бактериальной нагрузкой HР [30]. Чувствительность 13C-УДТ составляет 96%, специфичность – 93% [31].

Изначально УДТ разработан с использованием мочевины, меченной слабо радиоактивным изотопом 14С, однако в настоящее время он практически полностью заменен на тест с мочевиной, меченной стабильным не радиоактивным изотопом 13С [31]. 13C-УДТ предпочтительнее 14C-УДТ, поскольку позволяет избежать даже минимального воздействия радиации. Однако меньшая стоимость теста и оборудования обеспечивает популярность 14C-УДТ в развивающихся странах. Точность диагностики 13C-УДТ и 14C-УДТ не отличается, и оба теста можно считать «золотым стандартом» среди неинвазивных методов диагностики HР [32]. Ложноположительные результаты редки, но могут наблюдаться после выполнения ЭГДС с биопсией непосредственно перед тестом, у больных, перенесших резекцию желудка, а также при значительном снижении секреции желудка.

уреазный дыхательный тест
УДТ также основан на выявлении уреазной активности НР. В присутствии НР происходит гидролиз принятого per os раствора мочевины, меченного изотопом углерода (13C или 14C)

Небольшое количество ложноотрицательных результатов может быть связано с нарушением методики взятия и хранения проб выдыхаемого воздуха, физической нагрузкой накануне и в процессе выполнения теста. Как и при большинстве других тестов, достоверный результат УДТ может быть получен после 2-недельной отмены ИПП и не ранее чем через 4 нед после прекращения приема антибиотиков и препаратов висмута. Консенсус Маастрихт V оценивает УДТ с меченой мочевиной как лучший способ диагностики НР с высокой чувствительностью и специфичностью и с отличной производительностью как для первичной диагностики инфекции, так и для оценки эффективности эрадикации [10].

В России получил распространение дыхательный тест с немеченой мочевиной («Хелик-тест»). Результаты открытого многоцентрового исследования эффективности дыхательных тестов продемонстрировали его недостаточную чувствительность (78%) и низкую специфичность (62%) [33]. Авторы другого исследования «Хелик-теста» отметили, что низкая специфичность NH3-уреазных тестов и, как следствие, высокая частота ложноположительных результатов не допускают их использование для первичной диагностики инфекции и контроля эффективности эрадикации НР [34].

Исследование кала на наличие антигена НР

Анализ кала на антиген HР (АГ HР) – это другой неинвазивный метод диагностики с высокой чувствительностью (94%) и специфичностью (97%) [35]. Существует два варианта исследования: иммуноферментный анализ (ИФА) и иммунохроматографический анализ (ИХА) с использованием поликлональных (ПА) или моноклональных (МА) антител. Тесты на основе МА более точны, а ИФА обеспечивают более надежные результаты, чем ИХА [35].

Наряду с 13С-УДТ моноклональный тест на основе ИФА рекомендован как для первичной диагностики НР-инфекции, так и для контроля эрадикации [10]. Моноклональный АГ в кале является удобным и эффективным тестом для диагностики НР у детей [36, 37]. Кроме того, исследование антигена HР можно применять для эпидемиологических исследований и программ скрининга ввиду относительно невысокой стоимости исследования и оборудования [21]. Причинами ложноотрицательных результатов могут являться неравномерное распределение АГ в каловых массах, разрушение АГ при замедлении эвакуации каловых масс (запоры), желудочно-кишечное кровотечение [37].

Серологический метод – выявление антител IgG к HР в плазме крови

Колонизация НР вызывает системный иммунный ответ. Через 3–4 нед после инфицирования в крови больных появляются антитела к НР Эти антитела определяются путем ИФА. Поскольку инфекция является хронической и ее спонтанный клиренс невозможен, то положительные серологические тесты у нелеченых пациентов указывают на наличие текущей инфекции. Специфичность метода – 93–94%, чувствительность – 59–71% [38].

Несмотря на то что уровень антител в процессе успешной эрадикации падает, серологическая реакция остается положительной в течение ряда лет. Этот «серологический рубец» не позволяет использовать серологическое исследование крови для оценки эффективности лечения (причина ложноположительных результатов). Кроме того, серологический метод мало информативен у пациентов со слабым иммунным ответом, а антитела IgG появляются не ранее чем через месяц после инфицирования (причина ложноотрицательных результатов).
Преимуществом серологического метода для первичной диагностики НР является возможность его использования у лиц, принимающих ИПП и антибиотики [10], а также после состоявшегося желудочно-кишечного кровотечения и при атрофии СОЖ. Все перечисленные ситуации ассоциированы со снижением бактериальной «нагрузки», ввиду чего остальные диагностические тесты могут дать ложноотрицательный результат [39].

Растет интерес к расширению возможностей выявления НР-инфекции в режиме реального времени во время эндоскопического обследования желудка, что позволит сократить расходы на диагностику и лечение. Новые возможности для диагностики не только предраковых заболеваний желудка, но и НР-инфекции открыло исследование в узкоспектральном режиме. Узкоспектральная визуализация (linked color imaging – LCI) – новый метод визуальной эндоскопии, разработанный в Токио, основанный на использовании узкополосного коротковолнового света, что позволяет обнаружить воспаление или атрофию и предраковые изменения в слизистой оболочке.

Серологический метод
Колонизация НР вызывает системный иммунный ответ. Через 3–4 нед после инфицирования в крови больных появляются антитела к НР Эти антитела определяются путем ИФА

Проведено ретроспективное исследование эндоскопических изображений 60 пациентов (30 с доказанной HР-инфекцией и 30 – без НР), с целью сравнения точности LCI и традиционной эндоскопии в белом свете (white-light endoscopy – WLE) для диагностики HР-инфекции. Оценивалась эндоскопически выявленная диффузная гиперемия слизистой оболочки, которая могла коррелировать с НР-инфекцией. Авторы нашли более высокую точность, чувствительность и специфичность (85,8; 93,3 и 78,3%, соответственно) для диагностики HР с использованием LCI по сравнению с обычным WLE (74,2; 81,7 и 66,7%, соответственно). Авторы пришли к выводу, что эндоскопия с применением LCI более информативна, чем WLE, для выявления диффузной гиперемии СОЖ и, соответственно, подозрения на наличие HР [40].

Основными задачами, стоящими перед врачом, являются диагностика HР, подбор эффективной схемы терапии и, в дальнейшем, оценка эффективности проведенного лечения. При выборе метода тестирования HР необходимо, в первую очередь, учитывать его чувствительность и специфичность. Каждый из применяемых сегодня методов имеет свои недостатки, и поэтому ограничиваться в практической деятельности только одним из них нежелательно. Методы, которые можно использовать для первичной диагностики, представлены в табл. 3, для контроля эффективности терапии – в табл. 4.
Прием ИПП ограничивает точность диагностических методов в связи со снижением уреазной активности НР, а также уменьшением количества вегетативных (спиралевидных) форм бактерии. В одном исследовании при сравнении подавляющего действия ИПП на HР показано, что, в отличие от омепразола и лансопразола, пантопразол не ингибирует рост HР и уреазу [40]. Исследуется диагностическая ценность тестов после 7-дневной отмены ИПП. Тем не менее универсальной рекомендацией остается 14-дневная отмена любых ИПП перед большинством тестов. 

Измененный дыхательный тест 13С на helicobacter pylori

Дыхательный тест 13С на helicobacter pylori является неинвазивным методом диагностики и текущего контроля хода лечения
Прежние методы диагностики ограничивались косвенными доказательствами наличия антител к helicobacter pylori, выявлением helicobacter pylori в кале или биоптате.
Недостатком часто используемого скрининга методом иммуноферментного анализа (EIA) для выявления антител к helicobacter pylori является его неэффективность в отношении недавно произошедшего заражения, когда антитела еще не выработались. Также он не подходит для контроля эрадикации, поскольку антитела сохраняются длительное время.

Недостатком выявления helicobacter pylori в кале является зависимость от консистенции стула, из-за которой количество антител может существенно различаться. К тому же анализ кала на helicobacter pylori не подходит для текущего контроля хода лечения. Инвазивная эндоскопическая диагностика обременительна для пациента, не исключает риска кровотечения, к тому же ее результаты не отличаются достоверностью, потому что helicobacter может распределяться по слизистой желудка неравномерно. Поэтому для повышения достоверности исследования биоптаты приходится брать из различных участков слизистой.

Дыхательный тест с изотопом мочевины 13C дает возможность проводить неинвазивную первичную диагностику и контроль хода лечения. После приема изотопа мочевины 13С внутрь бактериальная уреаза начинает его расщепление на изотоп диоксида углерода 13С и аммиак. Изотоп 13С не является радиоактивным, поэтому он полностью безопасен для человека. Тест можно без ограничений использовать для обследования беременных.

Ход тестирования

  1. Пациент выдыхает воздух в специальный пакет (нулевая проба).
  2. Пациент должен, не разжевывая, проглотить 50 мг мочевины, содержащей изотоп 13C (таблетки Diabact Urea Breath Test), запивая ее 50–100 мл воды.
  3. Через 10 минут пациент снова выдыхает воздух во второй пакет.

Нормальные показатели
Результаты: Оценка результата производится методом спектрометрии изотопа (определение содержания изотопа 13С в диоксиде углерода).
Если за 10 минут количество изотопов 13С в диоксиде углерода увеличилось больше, чем на предельно допустимый показатель (1,7 %), результат считается положительным.

отрицательный результат: < 1,3 %
граничный результат: 1,3–1,7 %
положительный результат: > 1,7 %

Рекомендация 
Текущий контроль хода лечения необходимо выполнить через 4–6 недель. Прием антибиотиков и препаратов висмута необходимо прекратить за 28, а ингибиторов протонной помпы – за 14 дней до исследования.

Источники:

https://www.mdi-labor.de/ru/dlja-vracej/informacija-laboratorii/d-chatel-n-j-test-13s-na-helicobacter-pylori/

https://con-med.ru/magazines/terapevticheskiy_arkhiv_/terapevticheskiy_arkhiv_-12-2018/metody_diagnostiki_infektsii_helicobacter_pylori_v_klinicheskiy_praktike/

https://helix.ru/kb/item/40-

https://www.kp.ru/guide/analiz-na-khelikobakter-pilori.html

Оставьте первый комментарий

Оставить комментарий

Ваш электронный адрес не будет опубликован.


*